衡山金丝桃 Hypericum hengshanense W. T. Wang是广义藤黄科金丝桃属多年生草本植物 (图1)，生长于海拔800 m左右的土坡、路旁或树林边缘。该植物是我国特有种，分布于湖南衡阳和新宁、江西永新和广昌、广西贺州、广东怀集和连山等区域。据《湘蓝考》，在苗、汉民间医药中，其全草用于治疗风湿骨痛、身腹水肿。重点实验室龙春林教授团队前期民族植物学调查发现，衡山金丝桃在湖南部分地区民间，用作中药“王不留行”，有活血通经、下乳消肿的功效，主要用于治疗乳痈、乳汁不下等病症。然而，关于衡山金丝桃的现代化学和药理学研究十分有限。

图1. 衡山金丝桃Hypericum hengshanense W. T. Wang生境和植株（摄于衡阳）

团队前期采用基于UPLC-QTof-MS^E技术的非靶向代谢组学对7种国产金丝桃属植物的化学成分全面表征分析时发现，衡山金丝桃具有丰富的单萜杂合间苯三酚类monoterpenoid acylphloroglucinols (MAPs) (Industrial Crops & Products 173 (2021), 114156)。然而，由于MAPs具有大量的同分异构体，用质谱鉴定的方法很难将其区分，结构鉴定具有很大的难度。通过提取MAPs的基础离子碎片m/z 207 [M–H]^– 和 m/z 221 [M–H]^–，对MAPs的极性分布进行分析，发现其主要分布在中等极性部位 (t_R = 2.9‒6.3 min)，如图2所示。大极性部位 (t_R = 0‒3.3 min) 的化学成分主要是奎宁酸、绿原酸、金丝桃苷、槲皮苷、芦丁、槲皮素、山奈酚等黄酮或黄酮苷类；小极性部位 (t_R = 6.0–9.0 min) 则主要为脂质类成分。MAP类是衡山金丝桃中的一类主要成分，其含量丰富、结构多样，且目前尚无深入的科学研究报道。鉴于MAP类化合物显著的抗肿瘤等生物活性，对衡山金丝桃中的MAP类成分进行挖掘十分有必要。

图2甲醇提取物的BPI离子流色谱图及MAP类化合物分布情况（负离子模式）

团队采用结构导向分离 (图3) 结合多种色谱学和波谱学方法对衡山金丝桃中MAP 类化学成分进行研究，分离鉴定了25个MAPs (图4)，其中新化合物16个；并且通过量子计算化学的方法对其ECD图谱进行模拟，确定了这些MAPs的绝对构型 (图5)。

图3 衡山金丝桃中MAP类成分的薄层色谱显色、紫外吸收、质谱碎片离子特征

图4. 衡山金丝桃中的MAPs (1–19)

图5 衡山金丝桃中MAPs的计算ECD图谱

对这些化合物进行体外抗肿瘤细胞增殖活性筛选，发现其中16个化合物对A-549、HL-60、SMMC-7721、SW-480、MCF-75种癌细胞具有广谱抑制作用，IC₅₀ = 7.54–45.70 μM (图6)。

图6 衡山金丝桃中MAPs对5种肿瘤细胞增殖的抑制作用 (n = 3, *** p < 0.001, ** p < 0.01; 顺铂DDP为阳性对照)

该研究基本阐明了衡山金丝桃中的主要化学成分，并且深入地对代谢组学难以鉴定的MAPs同分异构体进行了研究，获得了类型多样的异戊烯基间苯三酚：包括单环 (15–19), 二环 (2–8), 三环 (9–14), 和多环 (1) 类型。

此外，对其抗肿瘤活性进行构效分析，发现此类的结构和药效变化主要在异戊烯基部分；推测异戊烯基不成环类化合物的活性位点可能与酰基部分的C-2′位以及末端异戊烯基的结构有关；单环结构中，呋喃环结构活性弱于吡喃环结构；二环结构中C-13位羟基可能会减弱其对肿瘤细胞增殖的抑制活性 (图7)。这项研究结果在一定程度上解读了我国民间用其“消肿”的传统知识。

图7 图文摘要

该研究成果以“Monoterpenoid acylphloroglucinols from Hypericum hengshanense W. T. Wang with antiproliferative activities”为题，在天然产物经典期刊Phytochemistry (JCR Q1) 上发表（文章链接：https://doi.org/10.1016/j.phytochem.2022.）。民族地区生态环境国家民委重点实验室为第一署名单位，张瑞飞博士为文章第一作者，龙春林教授为通讯作者，程卓、方琼和纽约城市大学Edward Kennelly教授为共同作者。该研究得到了国家自然科学基金（31870316 & 31761143001）和中央民族大学交叉学科研究专项（2022GJAQ04 & 2020MDJC03）的支持。